用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基檢測(cè)沉降菌測(cè)試方法
方法概述
本測(cè)試方法采用沉降法，即通過(guò)自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時(shí)間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見(jiàn)的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來(lái)判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來(lái)評(píng)定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。
所用的儀器和設(shè)備
⑴高壓消毒鍋
使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照儀器說(shuō)明書(shū)操作。
⑵恒溫培養(yǎng)箱
必須定期對(duì)培養(yǎng)箱的溫度計(jì)進(jìn)行檢定。
⑶培養(yǎng)皿
一般采用?90mm×15mm的硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。
⑷培養(yǎng)基
普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基或其他藥典認(rèn)可的培養(yǎng)基。其配制方法見(jiàn)附錄A（標(biāo)準(zhǔn)的附錄）。
測(cè)試步驟
⑴采樣方法
將已制備好的培養(yǎng)皿按5.4.1.2的要求放置，打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露0.5h，再將培養(yǎng)皿蓋蓋上后倒置。
⑵培養(yǎng)
①全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
②在30℃～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于48h。
③每批培養(yǎng)基應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，檢驗(yàn)培養(yǎng)基本身是否污染。可每批選定3只培養(yǎng)皿作對(duì)照培養(yǎng)。
⑶菌落計(jì)數(shù)
①用肉眼直接計(jì)數(shù)，標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，然后用5～10倍放大鏡檢查，不否遺漏。
②若培養(yǎng)皿上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2 個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。
注意事項(xiàng)
⑴測(cè)試用具要作滅菌處理，以確保測(cè)試的可靠性、正確性。
⑵采取一切措施防止人為對(duì)樣本的污染。
⑶對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細(xì)的記錄。
⑷由于細(xì)菌種類(lèi)繁多，差別甚大，計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察，不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長(zhǎng)的菌落，并須注意細(xì)菌菌落與培養(yǎng)基沉定物的區(qū)別，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。
⑸采樣前應(yīng)仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。
測(cè)試規(guī)則
⑴測(cè)試狀態(tài)
①沉降菌測(cè)試前，被測(cè)試潔凈室（區(qū)）的溫濕度須達(dá)到規(guī)定的要求，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在規(guī)定值內(nèi)。
②沉降菌測(cè)試前，被測(cè)試潔凈室（區(qū)）已經(jīng)過(guò)消毒。
③測(cè)試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種，測(cè)試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報(bào)告中注明測(cè)試狀態(tài)。
⑵測(cè)試人員
①測(cè)試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級(jí)別的工作服。
②靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)測(cè)試人員不得多于二人。
⑶測(cè)試時(shí)間
①對(duì)單向流，如100級(jí)凈化房間及層流工作臺(tái)，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于10min后開(kāi)始。
②對(duì)非單向流，如10 000級(jí)、100 000級(jí)以上的凈化房間，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30min后開(kāi)始。
⑷沉降菌計(jì)數(shù)
采樣點(diǎn)數(shù)目及其布置
②較少采樣點(diǎn)數(shù)目
沉降法的較少采樣點(diǎn)數(shù)可按表1確定。
表1 較少采樣點(diǎn)數(shù)目
在滿足較少測(cè)點(diǎn)數(shù)的同時(shí)，還宜滿足較少培養(yǎng)皿數(shù)，見(jiàn)表2。
表2 較少培養(yǎng)皿數(shù)
③采樣點(diǎn)的布置
采樣點(diǎn)的位置可以同懸浮粒子測(cè)試點(diǎn)。
）工作區(qū)采樣點(diǎn)的位置離地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。
）可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加采樣點(diǎn)。
采樣點(diǎn)位置的詳細(xì)規(guī)則見(jiàn)附錄B（標(biāo)準(zhǔn)的附錄）。
⑸記錄
測(cè)試報(bào)告中應(yīng)記錄房間溫度、相對(duì)濕度、壓差及測(cè)試狀態(tài)。
測(cè)試報(bào)告的編寫(xiě)見(jiàn)附錄C（標(biāo)準(zhǔn)的附錄）。
⑹結(jié)果計(jì)算
①用計(jì)數(shù)方法得出各個(gè)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。
②平均菌落數(shù)的計(jì)算，見(jiàn)式（1）。
平均菌落數(shù)M= ……………（1）
式中：M——平均菌落數(shù)；
——1號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)；
——2號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)；
——n號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)；
——培養(yǎng)皿總數(shù)。
⑺結(jié)果評(píng)定
用平均菌落數(shù)判斷潔凈室（區(qū)）空氣中的微生物。
①潔凈室（區(qū)）內(nèi)的平均菌落數(shù)必須低于所選定的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)。
②若某潔凈室（區(qū)）內(nèi)的平均菌落數(shù)超過(guò)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，則必須對(duì)此區(qū)域先進(jìn)行消毒，然后重新采樣兩次，測(cè)試結(jié)果均須合格。
